LF200倒置荧光显微镜AO-PI法活死细胞双色荧光染色检测完整解决方案

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莱特 LF200 倒置荧光显微镜在 AO/PI 活死细胞双染检测中的应用方案

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01. 应用背景与双色荧光探针检测原理

评估细胞活力是生物医药研究中的基础步骤。AO/PI双色荧光染色法能够同步鉴别活细胞质膜功能与死细胞膜损伤状态，为实验室定量分析提供清晰的图谱依据。

荧光探针	膜穿透特性	作用机制与靶点	适配光谱及通道
吖啶橙 (AO) (绿色荧光)	膜透过型 (脂溶性)	自由穿透完整活/死细胞膜，与双链 DNA 嵌合发出强绿色荧光	Ex: 488 nm / Em: 525 nm (匹配 FITC/GFP 绿光通道)
碘化丙啶 (PI) (红色荧光)	非膜透过型 (仅透过受损膜)	仅在质膜受损时穿入胞内，与双链 DNA 嵌合发出红色荧光	Ex: 535 nm / Em: 617 nm (匹配 TRITC/CY3 红光通道)

02. LF200 倒置显微硬件技术优势

???? 一体化LED 荧光激发与多通道选配
内置LED 光源与激发块集成设计，支持无级调光与自动光强记忆。

????超长工作距离聚光系统（可达172mm）
聚光镜摆出后支持高培养瓶或细胞工厂的快捷扫描观察。

????低手位同轴传动与左下倾数码接口
侧向数码接口具备100% 通光率，不遮挡目镜视角。

03. 5 步标准化检测应用流程

???? STEP 01\|工作液配制与样品洗涤	使用 PBS 将 AO/PI 配制成工作液（AO 约 5–10 μg/mL，PI 约 10–20 μg/mL），样品洗涤 1–2 次消除干扰。
???? STEP 02\|混合染色与短时温育	按 1:1 混合或直接加入培养孔，室温避光孵育 5–10 分钟，建议 20 分钟内完成采集。
???? STEP 03\|快速上样与相衬聚焦	样品固定于载物台，开启暖色 LED 明场，转动相衬盘利用低手位手轮快速锁定视野。
???? STEP 04\|多通道荧光图像采集	切至 FITC 通道采集绿光活细胞，切至 TRITC 通道采集红光死细胞（系统自动还原设定光强）。
???? STEP 05\|图像叠加与定量分析	通过软件对双通道图像进行 Merge 叠加，自动计算细胞存活率：Vitality (%) = [Live / (Live + Dead)] × 100%。

04. 典型双色成像结果评估

LF200下采集的高信噪比细胞荧光图谱（亮视野与极低背景噪点）

05. 实验注意事项与设备维护指南

1. 建议在20 分钟内完成采集，避免假阳性。
2.适度降低LED 输出功率，延长荧光抗淬灭时间。
3.载物台液体溢出应及时用75% 乙醇湿润无尘纸擦拭。

莱特 LF200 倒置荧光显微镜在AO-PI活死细胞双染检测中的应用方案