CKX53倒置显微镜荧光升级及细胞活力双色荧光染色（AO-PI 法）检测应用方案

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CKX53 倒置荧光显微镜 Calcein AM / PI 活死细胞双染检测应用方案

???? 医疗生物

01. 应用背景与双色荧光探针作用机制

评估细胞活力是生物医药研究中的基础步骤。Calcein AM / PI 双色荧光染色法能够同步鉴别活细胞质膜功能与死细胞膜损伤状态，为实验室定量分析提供清晰的图谱依据。

荧光染料	透膜特性	作用机制与靶点	光谱参数
Calcein AM (黄绿荧光)	透膜型 (质膜透过)	活细胞内源性酯酶剪切产生强负电荷 Calcein，保留于胞质发出强绿光	Ex: 494 nm / Em: 517 nm (匹配 FITC/GFP 通道)
Propidium Iodide (PI) (红色荧光)	非透膜型 (仅死细胞膜受损)	穿透受损质膜与双链 DNA 嵌合发出强红色荧光，特异性标记死细胞	Ex: 535 nm / Em: 617 nm (匹配 TRITC/Cy3 通道)

02. CKX53 倒置显微硬件技术优势

???? 长寿命LED 多通道电动荧光
集成LED 光源发光稳定，高透过率带通滤镜组能够精准区分绿光与红光信号，无光谱串道。

????明亮环境遮光观察设计（Lighting Shield）
专有遮光板可移入光路阻挡室内环境光，无需暗室即可获得高对比度荧光画面。

????超净工作台防紫外适配与人体工程学
轻巧机身防紫外涂层，倾斜目镜与前面板控制旋钮提升实验效率。

03. 5 步标准化检测应用流程

???? STEP 01\|工作液配置与样品洗涤	将 Calcein AM 与 PI 用无血清培养基稀释（Calcein AM 约 2 μM，PI 约 4 μM）；样品用 PBS 洗涤 1-2 次清除血清干扰。
???? STEP 02\|细胞染色与孵育	加入双染工作液，置于 37°C、5% CO₂ 培养箱避光孵育 15–30 分钟。
???? STEP 03\|快速上样与相衬定位	样品置于载物台，开启 LED 明场，利用 iPC 整合相衬系统（4X–40X 免换环）快速锁定视野对焦。
???? STEP 04\|双色荧光成像采集	展开遮光板，切至 FITC 通道采集活细胞黄绿荧光，控制按钮切至 TRITC 通道采集死细胞红荧光。
???? STEP 05\|图像融合与定量评估	借助相机控制软件进行通道叠加，计算活细胞率与死细胞比例。

04. 典型双色成像结果评估

05. 实验注意事项与设备维护指南

1. 染色时间建议控制在15–30 分钟，避免荧光渗出或背景升高。
2.适度调节LED 功率，延长荧光抗淬灭时间。
3.开启超净台紫外灯前盖好镜头罩，保护光学部件。

CKX53 倒置荧光显微镜 Calcein AM / PI 活死细胞双染检测应用方案