OLYMPUS CKX53倒置显微镜荧光升级及Calcein AM-PI 活死细胞双染检测应用指南

???? 【实验室科研装备升级与细胞活性评估方案】

OLYMPUS CKX53倒置显微镜荧光升级及
Calcein AM / PI 活死细胞双染检测应用指南

基于CKX-UVBG-E 电动智能模块· 高灵敏双色特异标记· 快速多通道一键采集

【01】方案背景与Calcein AM / PI 双色标记原理 (应用基础)

在细胞毒理学、组织工程、药物筛选及肿瘤学研究中，准确测定细胞存活率与评估细胞毒性是实验的核心环节。Calcein AM（乙氧基甲基荧光素阿醋酸酯）与Propidium Iodide（碘化丙啶，PI）联合使用的双色荧光染色法，利用两种探针不同的膜穿透特性与胞内反应机制，实现同一视野下活/死细胞的高灵敏特异性区分：

【02】CKX53显微荧光升级方案（CKX-UVBG-E模块） (硬件优势)

常规OLYMPUS CKX53 显微镜主要侧重于明场和相衬活细胞观察。加装专为其研制的CKX-UVBG-E 电动智能荧光模块后，无需更换主机，即可升级为多通道倒置荧光显微平台：

◆ 内陷卡扣结构，保持载物台顺畅操作空间

模块将大功率LED光源与多通道激发块一体化集成为紧凑盒体，采用内陷安装槽与壳体卡扣设计，结构极其薄型化。不占用载物台下方空间，确保物镜转动无阻碍。

◆ 彩色大屏与单指多功能操控旋钮

配备1.44 英寸LCD彩色大屏，以彩色方柱和百分比数值清晰实时显示当前激发通道与光强；配合防滑指压多功能旋钮，单指按压与旋转即可顺畅完成切换与调光。

◆ 长寿命LED光源与通道光强智能记忆

采用大功率LED 光源（使用寿命> 30,000 小时），开机即用，免去预热过程。内置光强记忆功能——当在B 通道（Calcein绿光）与G 通道（PI红光）之间切换时，自动还原此前设定的功率，减缓荧光漂白。

【03】Calcein AM / PI 双色检测标准操作流程 (标准化步骤)

◆ Step 1｜染色工作液配制与细胞洗涤

✔ 工作液配制：用PBS 或无血清培养基将Calcein AM 与PI稀释至合适浓度（推荐终浓度：Calcein AM 约2 μM，PI约4 μM），现配现用并避光保存。

✔ 细胞洗涤：取待测贴壁或悬浮细胞，用温育的PBS 轻轻洗涤1–2次，消除培养基中血清酯酶成分对Calcein AM 的干扰。

◆ Step 2｜样品孵育与避光染色

✔ 加入染色液：向细胞样品中加入适量双染色工作液，确保充分覆盖细胞层。

✔ 避光温育：置于37°C、5% CO₂ 细胞培养箱中避光温育15–30分钟。

◆ Step 3｜CKX53上样与相衬快速定位

✔ 样品固定：将培养板或培养皿置于CKX53载物台上，调节Universal Holder 标本夹固定。

✔ 相衬寻焦：开启明场LED，利用iPC整合相衬系统（4X–40X切换无需换环）快速锁定代表性视野焦面。

◆ Step 4｜电动智能通道切换与荧光采集

✔ 采集活细胞：按键快速切换至B激发通道（FITC），采集活细胞黄绿荧光图像（胞质发光）。

✔ 采集死细胞：一键切换至G激发通道（TRITC），智能还原预设红光功率，采集死细胞红色荧光图像（胞核发光）。

◆ Step 5｜图像Merge叠加与定量分析

✔ 通道叠加：通过相机接口将图像传输至电脑，利用配套软件将绿光与红光通道进行Overlay叠加合并。

✔存活率计算：分别统计视野内的绿光活细胞数（Live）与红光死细胞数（Dead），计算细胞存活率：Vitality (%) = [Live / (Live + Dead)] × 100%。

【04】典型图像结果与数据评估 (成像质量)

【05】规范操作注意事项与设备保养建议 (日常维护)

???? Notice 1：染色孵育时间控制：染色孵育建议控制在15–30分钟内完成观察，避免Calcein渐进式渗出胞外增加背景荧光，或PI少量内吞导致误判。

???? Notice 2：激发光功率适度调控：充分利用CKX-UVBG-E的光强记忆与无级调光功能，在满足对比度的前提下调低功率，***程度减缓荧光淬灭速度。

???? Notice 3：散热风道与环境清洁：保持荧光模块侧面主动散热风扇风道通畅，避免杂物遮挡，定期用干燥气吹清理网罩灰尘。

???? Notice 4：镜片及载物台擦拭维护：若载物台或物镜表面沾染培养基或染色液，应及时使用75%乙醇湿润无尘纸轻轻擦拭，保持优良透光性能与设备卫生。